免疫共沉淀(Co-IP)
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实验原理
基于免疫学原理,利用与目标蛋白质特异性结合的抗体对其进行识别和富集,是检测蛋白质互作的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。Co-IP既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用,也可以用特异性的抗体与其中的一种蛋白质结合,之后通过Protein A+G Agarose 将复合物沉淀下来,然后用SDS-PAGE鉴定。
应用
该方法常用于解决蛋白质间的相互作用及其互作位点、信号转导途径、细胞周期、疾病机制、病原及药物靶点等方面的问题。
案例展示
参考文献:1. E. V P ,Manohar K ,Brandon K , et al.TDP43 interacts with MLH1 and MSH6 proteins in a DNA damage-inducible manner[J].Molecular Brain,2024,17(1): DOI: 10.1186/S13041-024-01108-3;
2. Oleg S ,Alyona K ,Alexey P , et al.SEMG1/2 augment energy metabolism of tumor cells.[J].Cell death & disease,2020,11(12):1047-1047. DOI: 10.1038/S41419-020-03251-W;