实验原理

标签蛋白-Pull down原理：将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白)，洗脱结合物通过 SDS-PAGE 电泳分离，最后经western blot或质谱分析，从而证实两种蛋白间的相互作用；

DNA/RNA-Pull down原理：首先对DNA以及RNA探针进行生物素标记 ，然后将其与细胞裂解液共同孵育，形成 DNA/RNA-蛋白质复合物，分离复合物得到蛋白质，通过蛋白免疫印迹（western blot）检测蛋白质互作或质谱（massspectrometry）预测互作蛋白。

检测方法

Pull down分为DNA Pull down 、RNA Pull down以及标签蛋白的Pull down(GST-pull down、MBP-Pull down )等。

优点

1. 可鉴别直接互作的蛋白；

2. 融合标签（GST、MBP）后的蛋白，纯化效率高；

3. 将一些难溶性蛋白变为可溶性蛋白，降低互作蛋白实验难度。

应用

  可用于检测DNA与蛋白质、RNA与蛋白质、以及蛋白质与蛋白质在体外的互作关系，同时也可用于DNA、RNA、蛋白质等诱饵的互作蛋白鉴定。

案例展示

参考文献：1. Oleg S ,Alyona K ,Alexey P , et al.SEMG1/2 augment energy metabolism of tumor cells.[J].Cell death & disease,2020,11(12):1047-1047. DOI： 10.1038/S41419-020-03251-W;

             2. Netnapa C ,Uraipan S ,Monwadee W , et al. Effect of the interaction between ribosomal protein L10a and insulin receptor on carbohydrate metabolism[J]. Heliyon,2020,6(12): DOI：https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2020.e05714;