细胞增殖
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细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。针对实验方案和实验目的的不同,采用不同方法。
1.直接计数法:血球计数板、细胞计数仪直接得出细胞数量。
2.检测细胞代谢活性:基于细胞代谢能力还原孵育的底物,使用分光光度计、酶标仪检测吸光度,从而间接测定活细胞数量,评价细胞增殖情况。代表方法:MTT比色法、CCK-8试剂盒、MTS比色法、XTT、SRB。
3.检测细胞DNA合成:细胞增殖过程中,DNA倍增是最显著的变化量之一,通过检测DNA量的变化,可判断细胞数量的变化。代表方法:同位素标记DNA、BrdU/EdU、常应用于细胞DNA修复、分化及细胞标记物追踪等方面。
4.检测ATP含量:ATP参与生物体内多种酶促反应,是活细胞新陈代谢的指标,因此,检测ATP含量可以直接反应细胞的数量及细胞状态。
5.活细胞荧光标记:羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料,可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上,当细胞分裂时,CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是在亲代细胞的一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
6.检测细胞增殖相关抗原:有些抗原只存在于增殖细胞中,因此常作为细胞增殖的标志。在对组织样本进行增殖表型的相关检测时,可通过免疫组化的方法检测增殖细胞特异性表达的某些特定蛋白,如增殖细胞核抗原PCNA,细胞核相关抗原Ki-67和微小染色体维持蛋白MCM等,间接反应细胞增殖的情况。由于这些细胞增殖因子在异常增殖的细胞中显著表达,该方法主要用于研究肿瘤细胞增殖。
7.染料排斥法:活细胞有排斥某些染料(如伊红、台盼蓝、苯胺黑等)的能力,而死细胞由于膜完整性的破坏,可被着色适合少量细胞的统计,一般用于绘制细胞生长曲线等。
8.CellTiter-Glo发光检测:是基于ATP检测的快速细胞活力检测法,灵敏度高、是细胞活力检测的金标准。
参考文献:Hashmi, Atif Ali et al. “Ki67 index in intrinsic breast cancer subtypes and its association with prognostic parameters.” BMC research notes vol. 12,1 605. 23 Sep. 2019, doi:10.1186/s13104-019-4653-x.
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