细胞凋亡是为维持内环境稳定、更好适应生存环境，由基因控制的细胞自主有序的死亡。常见的检测方法如下：

一、细胞凋亡的形态学检测

1．光学显微镜和倒置显微镜。未染色细胞：凋亡细胞的形态变形、体积变小，细胞膜完整但出现发泡现象，晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现变圆、皱缩、脱落。染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化、分割成块状，核膜裂解。

2．荧光显微镜和激光共聚焦显微镜。通过细胞核染色质的形态学改变，判断细胞凋亡的进展。常用DNA特异性染料（如：HO33342、HO33258、DAPI）结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时产生蓝色荧光。

二、Annexin V/PI双染色法

正常生理状态下，磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内侧，在细胞凋亡早期，PS翻转到细胞膜表面。Annexin V能与PS特异性结合。将Annexin V进行荧光素或生物素标记，可在流式细胞仪或荧光显微镜中检测凋亡早期的细胞。

碘化丙啶（Propidine Iodide，PI）是一种核酸染料，正常生理状态下，不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期细胞和死细胞中，PI能透过细胞膜使细胞核红染。

因此，通过Annexin V/PI双染色法，就可以区分凋亡早、晚期的细胞。

三、线粒体膜电位检测

线粒体跨膜电位的下降是细胞凋亡级联反应中的最早事件，一旦线粒体跨膜电位DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

一些亲脂性阳离子荧光染料（如JC-1）可与线粒体基质结合。正常生理状态下，线粒体负电性高，JC-1进入线粒体后以多聚体形式存在，呈现红色荧光；细胞凋亡时，线粒体发生去极化，负电性降低，JC-1则以单体形式存在于细胞质中，呈现绿色荧光增强。

四、DNA片断化检测

细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩、断裂，形成50-300 kbp长的DNA片段，或180-200 bp整数倍的寡核苷酸片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。

五、TUNEL（Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling）

脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。细胞凋亡中，染色体DNA断裂产生大量粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素等形成的复合物，标记到DNA的3'-末端，从而进行凋亡细胞检测。TUNEL可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片和从组织中分离的细胞的形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞。

六、Caspase-3活性的检测

Caspase-3在细胞凋亡信号传导多种途径中发挥功能。正常生理状态下，Caspase-3以酶原的形式存在于胞浆中，在凋亡早期阶段，被激活的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，Caspase-3的活性明显下降。

参考文献：Brown, D G et al. “Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation.” The Journal of biological chemistry vol. 268,5 (1993): 3037-9.

Xu K, Park D, Magis AT, et al. Small Molecule KRAS Agonist for Mutant KRAS Cancer Therapy. Mol Cancer. 2019, 18(1): 85.

Wei R, Cao J, Yao S. Matrine promotes liver cancer cell apoptosis by inhibiting mitophagy and PINK1/Parkin pathways. Cell Stress Chaperones. 2018, 23(6): 1295-1309.

Wu, Junhao et al. “Programmed cell death pathways in hearing loss: A review of apoptosis, autophagy and programmed necrosis.” Cell proliferation vol. 53,11 (2020): e12915. doi:10.1111/cpr.12915