细胞自噬
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细胞自噬是机体的自我保护机制,主要利用溶酶体选择性地清除自身受损、衰老或过剩的生物大分子和细胞器。
1.单荧光质粒检测:无自噬发生时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白聚集至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光,可以通过计数来评价细胞自噬活性的高低。
2.双荧光质粒检测:自噬发生时,mRFP-GFP-LC3质粒转移至自噬体膜,在荧光显微镜下成绿色荧光。当自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体后,酸性环境使GFP荧光淬灭,此时荧光显微镜下只能检测到红色荧光。
参考文献:Hansen, Tom Egil, and Terje Johansen.“Following autophagy step by step.”BMC biology vol. 9 39. 2 Jun. 2011, doi:10.1186/1741-7007-9-39.
Mizushima,Noboru et al.“Methods in mammalian autophagy research.”Cell vol. 140,3(2010):313-26. doi:10.1016/j.cell.2010.01.028.
Pan, Haitao et al.“Autophagic flux disruption contributes to Ganoderma lucidum polysaccharide-induced apoptosis in human colorectal cancer cells via MAPK/ERK activation.”Cell death & disease vol. 10,6 456. 11 Jun. 2019, doi:10.1038/s41419-019-1653-7.