细胞转染根据外源基因在细胞内整合方式或表达时间的不同，可分为瞬时转染和稳定转染。

一、瞬时转染：通过脂质体、磷酸钙、电穿孔、siRNA转染等方法，将外源载体导入细胞内，实现高水平表达。但外源基因不会整合到宿主细胞的染色体中，因此，随着细胞的生长分裂，外源基因逐渐丢失，一般会在96小时内失效。

1．脂质体转染：脂质体是由脂质双分子层组成的闭合囊泡结构。可以将外源DNA 分子包裹入带正电的阳离子脂质体中，随后被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。

2．磷酸钙-DNA共沉淀法：磷酸钙有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合，磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜，随后细胞通过内吞作用摄入外源DNA。

3．电穿孔/电转染：通过高强度的电场，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子，如：核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等，将其导入原核/真核细胞内。

4．siRNA转染（small interfering RNA，siRNA）：首先，长双链RNA（dsRNA）被核酸内切酶Dicer切割形成siRNA双链；随后，siRNA与Argonaute-2 （Argonaute family，AGO2）蛋白结合（该蛋白被认为是RNA诱导沉默复合物（RNAinduced silencing complex，RISC）的核心）；然后siRNA被分离成两条单链：引导链（Guide strand）和传递链（Passenger strand）；最后，传递链被降解，引导链-RISC复合物结合到互补的靶mRNA触发基因降解。

二、稳定转染：利用含抗性的载体，使外源基因整合到宿主细胞染色体中，通过抗性筛选得到稳转细胞株，从而能够持续稳定的表达目的基因，便于长期观察该基因对于细胞功能的影响以及蛋白相互作用。

目前构建稳转细胞系的常用方法为慢病毒侵染，主要流程包括：慢病毒表达载体的构建、慢病毒包装、病毒侵染和细胞抗性筛选。

参考文献：Mechanism of siRNA silencing http://www.uni-konstanz.de/FuF/chemie/jhartig/.

Maes, Margaret E et al.“Targeting microglia with lentivirus and A**: Recent advances and remaining challenges.” Neuroscience letters vol.707 (2019): 134310. doi:10.1016/j.neulet.2019.134310.

Biscans, Annabelle et al.“Diverse lipid conjugates for functional extra-hepatic siRNA delivery in vivo.” Nucleic acids research vol. 47,3 (2019):1082-1096. doi:10.1093/nar/gky1239.