其余细胞实验
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其余细胞实验:细胞周期检测、细胞铁死亡、细胞焦亡。
1.细胞周期检测:细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束的全过程,分为间期与分裂期。细胞分裂各个时期的DNA含量不同,通常正常细胞的G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
碘化丙锭PI,可以与细胞内DNA 和RNA 结合,用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到PI的荧光强度就直接反映了细胞内DNA的含量。
2.铁死亡:是一种铁离子依赖性的细胞程序性死亡。铁死亡诱导剂通过不同通路直接或间接作用于谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPXs),导致细胞抗氧化能力降低,细胞内脂质活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)堆积,最终引起细胞氧化性死亡。
铁死亡主要特征:1、细胞形态:线粒体变小,线粒体外膜破裂,膜密度增高,嵴减少,细胞核中形态变化不明显。2、细胞成分:脂质过氧化增高,ROS升高,GPX4、SLC7A11、NRF2、DHODH 和FSP1等多种分子表达异常。
铁死亡检测方法:显微镜检测细胞形态变化;线粒体膜电位检测;CCK-8、流式细胞术、TUNEL等检测细胞活性;qPCR/Western Blot方法检测铁死亡相关基因或蛋白的表达水平。
3.细胞焦亡(细胞炎性坏死):是机体的天然免疫反应,表现为细胞不断胀大直至膜破裂,导致细胞内容物释放,进而激活炎症反应。
细胞凋亡检测方法:扫描电镜检测细胞形态变化;CCK-8、流式细胞术、TUNEL等检测细胞活性;ELISA试剂盒检测炎症因子(IL-1β、IL-18)水平;qPCR/Western Blot方法检测焦亡相关基因或蛋白的表达水平(如:Caspase-1、ASC、NLRP3、GSDMD、GSDME等)。
参考文献:Chen, Jingxin et al.“LncRNA GACAT1 targeting miRNA-149 regulates the molecular mechanism of proliferation,apoptosis and autophagy of oral squamous cell carcinoma cells.”Aging vol. 13,16 (2021): 20359-20371.doi:10.18632/aging.203416
Huang,Chaoli et al.“Upregulation and activation of p53 by erastin‑induced reactive oxygen species contribute to cytotoxic and cytostatic effects in A549 lung cancer cells.”Oncology reports vol. 40,4 (2018): 2363-2370. doi:10.3892/or.2018.6585
Wang, Yupeng et al. “Chemotherapy drugs induce pyroptosis through caspase-3 cleavage of a gasdermin.” Nature vol. 547,7661 (2017): 99-103.doi:10.1038/nature22393.