实验原理

双荧光素酶报告基因实验是利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。同时，为了减少内在的变化因素对实验准确性的影响，将带有海*荧光素酶基因（rinilla luciferase)的质粒作为对照质粒与报告基因质粒共转染细胞，提供转录活力的内对照，使测试结果不受实验条件变化的干扰。                 

应用

双荧光素酶报告基因实验广泛应用于miRNA靶基因验证，转录因子调控验证，ceRNA研究等多种研究。且在增强子和衰减子研究，蛋白和蛋白作用研究，病毒，药物和细胞作用研究，RNAi作用研究，活体成像研究等多个领域有着广泛的应用。

案例展示

参考文献：1. Iqbal, A.; Yu, H.; Jiang, P.; Zhao, Z. Deciphering the Key Regulatory Roles of KLF6 and Bta-miR-148a on Milk Fat Metabolism in Bovine Mammary Epithelial Cells. Genes 2022, 13, 1828. https://doi.org/10.3390/genes13101828

                    2. Mabrouk, I.; Zhou, Y.; Wang, S.; Song, Y.; Fu, X.; Xu, X.; Liu, T.; Wang, Y.; Feng, Z.; Fu, J.; et al. Transcriptional Characteristics Showed That miR-144-y/FOXO3 Participates in Embryonic Skin and Feather Follicle Development in Zhedong White Goose. Animals 2022, 12, 2099. https://doi.org/10.3390/ani12162099